【dpph自由基清除实验实验流程图操作图解李熙灿XicanLi】在现代生物化学与食品科学的研究中，DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除实验是一项广泛用于评估抗氧化能力的经典方法。该实验不仅适用于天然植物提取物的活性分析，也常用于药物、保健品及功能性食品的抗氧化性能研究。本文将围绕“DPPH自由基清除实验”的基本原理、实验步骤以及操作要点进行详细解析，并辅以流程图示例，帮助读者更好地理解和掌握这一实验技术。

一、实验原理

DPPH是一种稳定的有机自由基，其在可见光区（约517 nm）具有较强的吸收峰。当加入具有还原能力的抗氧化物质时，DPPH自由基会被还原，导致其吸收峰减弱，通过测定吸光度的变化可计算出样品的抗氧化能力。

二、实验材料与仪器

- DPPH溶液（0.1 mM）

- 样品溶液（如植物提取液、维生素C等）

- 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）

- 分光光度计

- 移液枪、比色皿、试管等实验器材

三、实验步骤（流程图说明）

1. 准备标准曲线

- 配制不同浓度的抗氧化剂溶液。

- 每组加入一定量的DPPH溶液，混匀后静置一段时间。

- 使用分光光度计测定各组在517 nm处的吸光度。

2. 样品处理

- 将待测样品稀释至适当浓度。

- 按照相同的比例加入DPPH溶液，混匀后避光反应。

3. 测量吸光度

- 在设定时间点（如30分钟）后，使用分光光度计测定吸光度值。

4. 数据计算

- 计算自由基清除率公式：

$$

\text{清除率} = \left( \frac{A_0 - A}{A_0} \right) \times 100\%

$$

其中，$ A_0 $ 为对照组吸光度，$ A $ 为样品组吸光度。

5. 绘制标准曲线与结果分析

- 根据标准曲线确定样品的抗氧化能力。

四、注意事项

- 实验过程中应避免强光照射，防止DPPH提前分解。

- 所有试剂需现用现配，确保稳定性。

- 实验重复性高，建议至少做三次平行实验以提高准确性。

五、实验流程图（文字版示意）

```

开始

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├─ 准备DPPH溶液与样品溶液

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├─ 加入DPPH与样品混合

│

├─ 静置反应（30分钟）

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├─ 测定517nm吸光度

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├─ 计算清除率

│

└─ 结果分析与报告撰写

```

六、应用与意义

DPPH自由基清除实验因其简便、快速、灵敏等特点，被广泛应用于抗氧化活性的研究中。无论是对天然产物的活性评价，还是对新型抗氧化剂的研发，该实验都提供了重要的实验依据。

作者：李熙灿 / Xican Li

如需获取实验流程图PDF或PPT版本，请联系作者或参考相关实验手册。