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pET-28a(()大肠杆菌表达载体说明)

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2025-07-10 15:14:21

pET-28a(()大肠杆菌表达载体说明)】在分子生物学研究中,表达载体是实现外源基因在宿主细胞中高效表达的重要工具。其中,pET-28a( )是一种广泛应用于大肠杆菌系统中的原核表达载体,因其结构稳定、操作简便以及高效的蛋白表达能力,被众多实验室所采用。

pET-28a( )属于pET系列载体的一种,该系列由Novagen公司开发,主要用于在大肠杆菌中进行重组蛋白的诱导表达。其核心特点是利用T7噬菌体RNA聚合酶驱动目的基因的转录,从而实现高效率的蛋白合成。而pET-28a( )在此基础上进一步优化了克隆位点和筛选标记,使其更适用于蛋白质的融合表达与纯化。

该载体包含多个关键元件:

- T7启动子:作为强启动子,能够高效启动目的基因的转录;

- 氨苄青霉素抗性基因(Amp^R):用于筛选转化成功的菌株;

- 多克隆位点(MCS):提供多个限制性内切酶识别位点,便于插入目的基因;

- His标签序列:通常位于目的基因的N端或C端,方便后续通过亲和层析法对目标蛋白进行纯化;

- lacI基因:控制T7 RNA聚合酶的表达,使得蛋白表达可在特定条件下诱导。

在使用过程中,pET-28a( )通常需要与含有T7 RNA聚合酶的宿主菌株(如BL21(DE3))共同使用,以实现目的蛋白的高效表达。实验人员可根据实际需求选择不同的诱导条件(如IPTG浓度、诱导时间等),以获得最佳的表达效果。

此外,由于pET-28a( )具有良好的兼容性和可扩展性,它不仅适用于单一蛋白的表达,还可用于构建融合蛋白、构建突变体或进行蛋白功能研究等。因此,在生物技术、药物开发及基础科研等领域中,该载体均发挥着重要作用。

总之,pET-28a( )作为一种经典的原核表达系统,凭借其高效、稳定和灵活的特点,成为许多实验室不可或缺的研究工具。合理设计实验方案并优化表达条件,将有助于充分发挥该载体的优势,推动相关研究的深入发展。

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